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DiI, DiO, DiD 和 DiR细胞膜荧光探针怎么选?

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-06-30     
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Di系列细胞膜荧光探针想必大家一定不陌生,大家做细胞膜染色的时候经常会用到,今天给大家先容下常见的4类Di细胞膜荧光探针:DiI, DiO, DiD 和 DiR,Di系列染料是一类环境敏感型亲脂性膜染料,这类探针在进入细胞膜之前荧光非常弱,当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质)结合时,其荧光强度显著增强。一旦应用于细胞中,这类染料会在细胞内质膜中逐步扩散,在其最佳浓度条件下,可以扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。

 

腾讯体育直播DiI, DiO, DiD 和 DiR被激发后可以发出不同颜色的荧光,DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。

 

DiO、DiI、DiD、DiR的光谱图.jpg

DiO、DiI、DiD、DiR细胞膜荧光探针的光谱图

 

DiO, DiI, DiD 和 DiR几种细胞膜荧光探针的异同:

 

腾讯体育直播其中I、D、R分别代表了一个,两个,三个双键,它们是决定波长长度的关键,DiO, DiI, DiD 和 DiR这几款细胞膜荧光探针的结构式如下:

DiO高氯酸盐结构式.jpgDil高氯酸盐结构式.jpg
DiO高氯酸盐结构式Dil高氯酸盐结构式
DiD高氯酸盐结构式.jpgDiR碘化物结构式.jpg
DiD高氯酸盐结构式DiR碘化物结构式

 

DiO, DiI, DiD 和 DiR几种细胞膜荧光探针的异同:

名称荧光颜色应用货号
DiO(DiOC18(3))绿色荧光? DiO被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂,通常不会明显影响细胞的生存力,对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI,有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。? 还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移。22066
DiI (DiIC18(3))橙色荧光? DiI被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂,通常不会影响细胞的生存力。? DiI除了最简单的细胞膜荧光标记外,还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移,通过FRAP检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。22102
DiD (DiIC18(5))红色荧光? DID染料的染色效率高,均一,不易猝灭,无明显细胞毒性,且受自身荧光背景干扰小。? 目前DID已成功应用于多种细胞的体内示踪研究,如Treg细胞、间充质干细胞、肿瘤细 胞、造血干祖细胞等。22033
DiR (DiIC18(7))深红色荧光? DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织,在活体成像中用来示踪。常用于标记细胞质膜。两个18-碳链插入到细胞膜,从而特定的、稳定的细胞染色,几乎不会发生细胞间的染料转移。可以用乙醇配置其储存液。? DiR 染色后可进行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他试剂)的固定,但不建议在染色后进行透化的过程。22070


细胞膜荧光探针产品优点:

1. 应用广泛:主要作用是标记细胞膜,用于活的或固定的神经元等细胞或组织的长期示踪剂,同时还可以标记其他疏水结构,例如外泌体

腾讯体育直播2. 不会影响细胞的生存力

3. 体外培养的条件下可以存活很长时间

4. 在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为 0.2-0.6mm/day

腾讯体育直播5. 在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为 6mm/day

 

关于细胞膜荧光探针的使用技巧:

1.DiI 可以溶解于无水乙醇、DMSO 和 DMF,溶解度约为 1-2.5mg/ml,发现较难溶解时可以适当用超声处理以促进溶解。

腾讯体育直播2.用于细胞膜荧光标记时,DiI 的常用浓度为 1-25μM,最常用的浓度为 5-10 μM。

3. DiI 可以直接染色活的细胞或组织,染色时间通常为 5-20 分钟。

4. 染固定的细胞时,通常使用 4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。


Di家族细胞膜荧光探针选择小tips:

DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织(请您根据您的需求选择相应的探针),DiI比DiO荧光更亮;DiD,DiR(D12731)波长更长,更适合组织染色;

 

DiR应用实列赏析:

DiR应用实列.jpgDiR应用实列.jpg
DiR应用实列.jpgDiR应用实列.jpg
DiR应用实列.jpgDiR应用实列.jpg


源文献: Journal: Scientific Reports (2017)

 

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